王玉顺

四川大学华西口腔医院

摘要(Abstract)：

基因敲除小鼠模型是功能基因组学和疾病机制研究中不可或缺的核心工具。通过特异性地使小鼠体内一个或多个基因失活，研究人员得以在整体动物水平上精确解析基因功能、模拟人类疾病并评估潜在治疗策略。本文系统性地回顾了基因敲除小鼠技术的演进历程。文章首先阐述了基于胚胎干细胞（ESCs）的同源重Oreal重组技术这一经典方法的原理、里程碑意义及其固有的局限性，如周期长（通常超过1年）、效率极低（自然重组率仅约10 -6）。其次，本文重点聚焦于以CRISPR-Cas9为代表的基因编辑技术所引发的革命性变革。 CRISPR技术凭借其高达80%的敲除效率、简便、经济及可直接在受精卵中操作的优势，将模型构建周期缩短至2至3个月，并实现了多基因敲除、条件性敲除及大片段敲除等复杂操作。最后，本文探讨了当前基因敲除技术面临的挑战，如脱靶效应和镶嵌体问题，并展望了以单碱基编辑、引导编辑为代表的新一代基因编辑技术在构建更精准、更复杂小鼠模型中的广阔应用前景。

关键词(KeyWords)：

基因敲除；小鼠模型；同源重组；CRISPR-Cas9；基因编辑；疾病模型

参考文献(References)：

［1］马淑凤.CRISPR/Cas9 基因编辑技术介导的靶向 DNA 整合系统的构建及应用［D］.南方医科大学，2020. 

［2］田俊良.靶向修饰 H19/IGF2 的 CTCF 结合位点 DNA 甲基化对小鼠胚胎干细胞及早期胚胎发育的影响［D］.内蒙古大学， 2019.

［3］王超玄，孙航.基因敲除小鼠技术的研究进展［J］.生物工程学报，2019，35（05）：784-794.